白及[Bletilla striata (Thunb.) Reichb.f.]、小白及[B. forosana (Hayata) Schltr.]、黄花白及（B. ochracea Schltr.）、华白及[B. sinensis (Rolfe) Schltr.]是兰科白及属的传统药用植物。中国药典（2020年版，一部）规定中药材白及为植物白及的干燥块茎；小白及和黄花白及多作为云南民间药物，常代替白及入药；华白及因其种质的稀缺性被列入《中国物种红色名录》，入药较少。近年虽有报道贵州白及（B. guizhouensis Jie Huang & G. Z. Chen）为白及属新发现物种，但迄今暂未被《中国植物志》收录。因此本研究主要涉及白及、小白及、黄花白及3种白及属植物。

      由于多年的无序开采，白及资源急剧下降，现已被列入《中国植物红皮书——稀有濒危植物》第1册，并为《濒危野生动植物国际贸易公约》的保护物种。白及前期的报道多集中在生理、药理药化等领域，而细胞学相对较少。中药材基原的可靠性是规范化生产的首要问题，本研究以白及、小白及和黄花白及3种白及属植物的根尖为试验材料，优化了各物种的染色体制片技术，并分析了其核型特征，研究结果可为白及种质资源鉴定及种间亲缘关系和演化趋势研究提供参考，对白及规范化栽培技术完善和杂交育种具有一定的参考价值。主要研究结果及结论如下：

      1、通过对白及属药用植物染色体制片技术分析确定主要影响因素，利用单因素试验优化了白及属植物的染色体制片技术。结果表明：染色体制片中解离是关键，解离的温度和时间都会对制片效果造成显著影响。白及、小白及以及黄花白及3种植物的根尖经过8-羟基喹啉预处理6 h，染色体形态清晰；65℃水浴条件下，使用1 mol·L-1的盐酸解离10 min，染色体分散效果较好；改良苯酚品红溶液染色8 min，所得制片背景干净易观察。
       2、通过分析白及、小白及和黄花白及的核型数据，推测了白及属3种植物亲缘关系及进化趋势。结果表明：白及属3种植物均为二倍体，白及与黄花白及分别有32条染色体，染色体基数为16，而小白及则有30条染色体，染色体基数为15；染色体核型公式，白及为2n=2x=32=30m+2sm，小白及为2n=2x= 30=28m+2sm，黄花白及为2n=2x=32=28m+4sm，三者均是由近中部着丝点区（sm）和中部着丝点区（m）构成；白及的染色体的相对长度的组成为2n=2x= 6L+10M2+12M1+4S；小白及的相对长度的组成为2n=2x=8L+6M2+8M1+8S；黄花白及染色体的相对长度的组成为2n=2x=6L+6M2+12M1+8S。核不对称系数白及为57.59%，小白及为57.68%，黄花白及为57.51%，这3种植物的的核型均属于1B型，说明3种白及存在着较强的亲缘关系，且3种白及进化程度都较为原始。

      Bletilla striata (Thunb.) Reichb.f., B.forosana (Hayata) Schltr., B.ochracea Schltr. and B.sinensis (Rolfe) Schltr. are traditional medicinal plants of the genus Bletilla. The Chinese Pharmacopoeia (2020 edition, part one) stipulates that B. striata is the dry tuber of B. striata. B. forosana and B. ochracea are mostly used as folk medicines in Yunnan, often replacing B. striata as medicines; because of the scarcity of its germplasm, it is included in the ' Red List of Chinese Species ' and is less used as medicine. In recent years, it has been reported that B.guizhouensis Jie Huang & G.Z.Chen is a new species of Bletilla, but it has not been included in the Flora of China. Therefore, this study mainly involves three species of B. striata, B. forosana and B. ochracea.

     Due to years of disorderly exploitation, the resources of B.striata have declined sharply. It has been included in the first volume of the ' Chinese Plant Redbook-Rare and Endangered Plants ' and is a protected species of the ' Convention on International Trade in Endangered Wild Fauna and Flora '. The previous reports of B. striata were mostly concentrated in the fields of physiology, pharmacology and pharmacology, while cytology was relatively few. The reliability of the origin of Chinese medicinal materials is the primary problem of standardized production. In this study, the root tips of three species of B. striata, B. forosana and B. ochracea were used as experimental materials, the chromosome preparation technology of each species was optimized, and the karyotype characteristics were analyzed. The results can provide reference for the identification of germplasm resources of B. striata and the study of interspecific genetic relationship and evolution trend, and have certain reference value for the improvement of standardized cultivation techniques and cross breeding of B. striata. The main results and conclusions are as follows :

    1、The main influencing factors were determined by analyzing the chromosome preparation technology of Bletilla medicinal plants, and the chromosome preparation technology of Bletilla plants was optimized by single factor test. The results show that dissociation is the key in chromosome preparation, and the temperature and time of dissociation will have a significant impact on the production effect. The root tips of B. striata, B. forosana and B. ochracea were pretreated with 8-hydroxyquinoline for 6 h, and the chromosome morphology was clear. Under the condition of 65 ℃ water bath, 1 mol·L-1 hydrochloric acid was used to dissociate for 10 min, and the chromosome dispersion effect was better. The modified phenol fuchsin solution was dyed for 8 min, and the background of the film was clean and easy to observe.

     By analyzing the karyotype data of B. striata, B. forosana and B. ochracea, the genetic relationship and evolutionary trend of three species of Bletilla were speculated. The results showed that the three species of Bletilla were diploid. B. striata and B. ochracea had 32 chromosomes with a base number of 16, while B. forosana had 30 chromosomes with a base number of 15. Chromosome karyotype formula, B. striata was 2n = 2x = 32 = 30m + 2sm, B. forosana was 2n = 2x = 30 = 28m + 2sm, B. ochracea was 2n = 2x = 32 = 28m + 4sm, the three are composed of near middle centromere region (sm) and middle centromere region (m); the relative length of the chromosome of B. striata was 2n = 2x = 6L + 10M2 + 12M1 + 4S; the relative length of B. forosana was 2n = 2x = 8L + 6M2 + 8M1 + 8S; the relative length of chromosome of B. ochracea was 2n = 2x = 6L + 6M2 + 12M1 + 8S. The nuclear asymmetry coefficient of B. striata was 57.59 %, that of B. forosana was 57.68 %, and that of B. ochracea was 57.51 %. The karyotypes of these three plants all belonged to 1B type, indicating that there was a strong genetic relationship among the three B. striata, and the evolution degree of the three B. striata was relatively primitive.

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